Innocuité et immunogénicité d'un ID93 + GLA thermostable

Nature Communications volume 14, Numéro d'article : 1138 (2023) Citer cet article

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Les vaccins sous-unitaires contenant des adjuvants représentent une approche prometteuse pour la protection contre la tuberculose (TB), mais les candidats actuels nécessitent un stockage réfrigéré. Nous présentons ici les résultats d'un essai clinique de phase 1 randomisé en double aveugle (NCT03722472) évaluant l'innocuité, la tolérabilité et l'immunogénicité d'une présentation en flacon unique lyophilisé thermostable du candidat vaccin ID93 + GLA-SE par rapport aux deux vaccins non thermostables - présentation du vaccin en flacon chez l'adulte sain. Les participants ont été suivis pour les critères d'évaluation primaires, secondaires et exploratoires après l'administration intramusculaire de deux doses de vaccin à 56 jours d'intervalle. Les principaux critères d'évaluation comprenaient la réactogénicité locale et systémique et les événements indésirables. Les critères d'évaluation secondaires comprenaient les anticorps spécifiques de l'antigène (IgG) et les réponses immunitaires cellulaires (cellules mononucléaires et lymphocytes T du sang périphérique produisant des cytokines). Les deux présentations vaccinales sont sûres et bien tolérées et suscitent des anticorps sériques spécifiques à l'antigène robustes et des réponses immunitaires cellulaires de type Th1. Par rapport à la présentation non thermostable, la formulation de vaccin thermostable génère des réponses d'anticorps sériques plus importantes (p < 0,05) et davantage de cellules sécrétant des anticorps (p < 0,05). Dans ce travail, nous montrons que le candidat vaccin thermostable ID93 + GLA-SE est sûr et immunogène chez les adultes sains.

La tuberculose (TB) est l'une des principales causes infectieuses de morbidité et de mortalité, ayant tué 1,5 million de personnes et causé 10 millions de nouvelles infections dans le monde en 2020. Les deux tiers des nouveaux cas surviennent dans huit pays (Inde, Chine, Indonésie, Philippines, Pakistan, Nigéria, Bangladesh et Afrique du Sud)1. Depuis plus de 100 ans, un seul vaccin a été largement distribué pour la prévention de la tuberculose (Bacillus Calmette-Guérin, ou BCG). Ce vaccin a une efficacité limitée dans la prévention de la maladie tuberculeuse, étant le plus utile pour la prévention de la méningite tuberculeuse et de la maladie miliaire chez les jeunes enfants2. L'efficacité du vaccin chez l'adulte ou pour prévenir les maladies pulmonaires est plus modeste3, et la disponibilité du BCG est parfois limitée4.

Les efforts de développement de nouveaux vaccins antituberculeux ont le plus souvent reposé sur la sélection rationnelle d'antigènes rendus plus immunogènes par l'association avec des adjuvants vaccinaux5. Le domaine du développement de vaccins antituberculeux sous-unitaires avec adjuvant a été dynamisé par l'efficacité d'environ 50 % obtenue avec le candidat M72/AS01E lors des essais cliniques de phase 2b6. D'autres candidats vaccins antituberculeux sous-unitaires contenant un adjuvant sont également en cours de développement clinique7. Par exemple, ID93 + GLA-SE a démontré une innocuité et une immunogénicité prometteuses lors des essais cliniques de phase 2a8. Malgré ces progrès, aucun candidat-vaccin antituberculeux sous-unitaire thermostable avec adjuvant n'est en cours de développement clinique. Compte tenu de l'énorme fardeau mondial de la tuberculose, en particulier en Asie du Sud-Est et en Afrique subsaharienne, un vaccin thermostable pourrait offrir des avantages substantiels pour la distribution mondiale des vaccins9.

Diverses technologies peuvent être utilisées pour augmenter la thermostabilité des vaccins10,11. Cependant, l'adaptation des technologies thermostables pour les vaccins contenant des adjuvants ajoute une complexité substantielle11. Par exemple, des technologies de séchage telles que la lyophilisation ou le séchage par pulvérisation sont souvent utilisées pour améliorer la stabilité des vaccins. Cependant, le maintien de la structure particulaire inhérente à l'activité de nombreuses formulations d'adjuvants de vaccins, y compris les émulsions et les sels d'aluminium, nécessite des approches de développement et de caractérisation de processus uniques. Nous avons précédemment décrit la conception de la formulation, le développement du processus et la fabrication d'une formulation lyophilisée du candidat vaccin antituberculeux sous-unitaire avec adjuvant ID93 + GLA-SE qui a maintenu sa stabilité pendant 3 mois lorsqu'il est conservé à 37 °C12,13.

Nous présentons ici les résultats d'un essai clinique randomisé en double aveugle de phase 1 conçu pour évaluer l'innocuité, la tolérabilité et l'immunogénicité de ce candidat vaccin ID93 + GLA-SE lyophilisé à flacon unique par rapport à la présentation à deux flacons précédemment développée dans sujets adultes sains. Nous montrons que la présentation thermostable à flacon unique d'ID93 + GLA-SE suscite un profil d'innocuité similaire et un profil d'immunogénicité comparable ou amélioré à la présentation de vaccin à deux flacons non thermostable.

La participation de sujets humains à l'étude s'est produite du recrutement du 29 octobre 2018 au suivi, se terminant le 15 juin 2020. Un total de 93 participants ont été sélectionnés pour l'inclusion dans l'étude sur une période de recrutement de 6 mois, parmi lesquels 48 ont rencontré critères d'entrée à l'étude et ont été randomisés 1:1 en deux groupes de traitement (Fig. 1). Parmi les 45 échecs de dépistage, les raisons les plus courantes d'exclusion étaient les valeurs de laboratoire de dépistage non conformes à la normale, d'autres conditions médicales, le manque de bonne santé générale et le non-respect du protocole (Fig. 1). Les 48 participants inscrits ont reçu au moins une injection (population de sécurité), 45 participants ont reçu les deux injections et 44 participants ont terminé l'étude conformément au plan (population per protocole). Parmi les trois participants qui n'ont reçu que la première injection de l'étude dans le groupe de traitement 2 (vaccin antituberculeux non thermostable), deux ont été perdus de vue et un est devenu inéligible en raison d'une exigence professionnelle de vaccination avec un autre vaccin. Les échantillons des participants recevant une seule injection à l'étude ont été inclus dans l'analyse des données d'immunogénicité avant le jour d'étude 56, après quoi seuls les échantillons des participants ayant reçu les deux injections à l'étude ont été inclus dans l'analyse de l'immunogénicité. Un autre participant à l'étude s'est volontairement retiré de l'étude après le jour d'étude 70. Au total, 45 participants ont terminé la visite de suivi à long terme le jour d'étude 421 (44 ont reçu les deux injections et 1 a reçu une injection). D'autres écarts de protocole, tels que des visites et/ou des procédures manquées, sont décrits dans les informations supplémentaires. Le tableau 1 résume les caractéristiques démographiques et autres caractéristiques de base des participants inclus dans la population de sécurité (n = 48). Trente-six des 48 participants (75 %) étaient des femmes et 12 (25 %) étaient des hommes. L'âge des participants à l'inscription variait de 18 à 48 ans, avec une médiane de 23 ans. L'indice de masse corporelle (IMC) moyen des participants était de 24,1. Les races comprenaient 43 (90%) blancs, 2 (4%) asiatiques, 2 (4%) mixtes et 1 (2%) noir ou afro-américain.

Sur 93 sujets dépistés, 48 ​​répondaient aux critères de l'étude et ont été inscrits et assignés au hasard à deux groupes de traitement. Le groupe de traitement 1 comprenait 23 participants recevant le vaccin ID93 + GLA-SE à flacon unique thermostable ; Le groupe de traitement 2 comprenait 25 participants recevant le vaccin non thermostable à deux flacons ID93 + GLA-SE. La population de sécurité représente les participants ayant reçu au moins une injection. La population per-protocole représente les participants qui ont terminé l'étude conformément au plan.

Les deux présentations du vaccin ID93 + GLA-SE ont été jugées sûres et bien tolérées chez les participants adultes en bonne santé après administration intramusculaire (IM). Le schéma, le type, la gravité et la fréquence des événements indésirables (EI) étaient similaires dans les deux groupes de traitement. Le tableau 2 résume la proportion de participants présentant des EI par gravité, lien avec l'injection à l'étude et groupe de traitement. Des EI ont été signalés chez 98 % de tous les participants à l'étude. Les grades les plus élevés signalés pour les EI étaient le grade 1 chez 96 % et 92 % ou le grade 2 chez 22 et 36 % des participants des groupes de traitement 1 et 2, respectivement. Aucun EI de grade 3 ou 4, aucun événement indésirable grave (EIG) ou état pathologique potentiel à médiation immunitaire (PIMMC) n'a été signalé. La réactogénicité locale et systémique était courante. La plupart des participants ont signalé une douleur et/ou une sensibilité au site d'injection, la fatigue, les maux de tête et la myalgie étant les effets systémiques les plus courants. Les infections des voies respiratoires supérieures ou les diminutions de l'hémoglobine chez certains participants n'ont pas été considérées comme liées au traitement (informations supplémentaires, protocole d'étude). La plupart des EI se sont résolus sans traitement et aucun participant ne s'est retiré en raison d'un EI. Par conséquent, la présentation thermostable à un seul flacon du vaccin candidat ID93 + GLA-SE a été jugée tout aussi sûre et bien tolérée que la présentation du vaccin non thermostable à deux flacons à la dose administrée chez les adultes en bonne santé.

Les réponses des anticorps IgG à ID93 ont été évaluées dans chaque groupe de traitement. Des dosages immuno-enzymatiques d'anticorps IgG sériques (ELISA) ont été effectués sur des échantillons prélevés les jours d'étude 0, 14, 56, 70, 84 et 224 pour les IgG totales, IgG1, IgG2, IgG3 et IgG4. Les IgG totales ont également été évaluées pour les protéines de la sous-unité comprenant ID93 (Rv1813, Rv2608, Rv3619 et Rv3620). Les taux sériques d'anticorps IgG spécifiques à ID93 sont présentés sous forme de titre moyen au point final (MEPT), ainsi que le taux de réponse et le facteur de variation pour les IgG totales, par schéma thérapeutique (Fig. 2a – g et tableau supplémentaire 1). Les participants des deux groupes de traitement ID93 + GLA-SE ont développé de solides réponses d'anticorps spécifiques à ID93 avec un bruit de fond de faible niveau détecté au départ. Les réponses IgG spécifiques à ID93 sont restées élevées pendant 6 mois après la dernière vaccination dans les deux régimes. Les réponses IgG1 et IgG3 spécifiques à ID93 étaient supérieures aux réponses IgG2 et IgG4. Les réponses totales d'IgG spécifiques à la sous-unité ID93 étaient les plus élevées pour Rv1813, suivi de Rv2608, Rv3620 et Rv3619 (Fig. 1 supplémentaire). Dans tous les cas, les réponses maximales en anticorps ont été observées après la seconde injection. Les taux de réponse pour les IgG totales spécifiques à ID93, basés sur une multiplication par quatre par rapport au départ, étaient de 90 à 100 % aux jours d'étude 70 et 84 pour les deux groupes de traitement (Fig. 2a). Au jour d'étude 224, les taux de réponse IgG variaient de 63 à 85 % (Fig. 2a). La comparaison de la présentation à flacon unique thermostable à la présentation à deux flacons non thermostables a montré que le format thermostable a suscité une réponse d'anticorps significativement plus élevée dans plusieurs lectures aux points temporels de pointe. Par exemple, par rapport à la présentation à deux flacons non thermostables, la formulation thermostable à flacon unique a amélioré le facteur de variation des IgG spécifiques à ID93 (190,5 contre 33,0 au jour d'étude 70 [p = 0,0023] et 97,4 contre 32,2 au jour d'étude 84 [p = 0,0495]) (Fig. 2b) et le MEPT IgG spécifique ID93 (10868 contre 2583 au jour d'étude 70 [p = 0,0061]) (Fig. 2c).

n = 20 à 25 échantillons biologiquement indépendants selon le groupe de traitement et le moment, voir le tableau supplémentaire 1. a Le taux de réponse des anticorps sériques a été calculé comme au moins une multiplication par quatre des IgG spécifiques à ID93 par rapport au départ, tel que mesuré par ELISA. Les taux de réponse ont été comparés à l'aide du test exact de Fisher. Des différences ont été détectées sur la base d'un test bilatéral et p ≤ 0,05 (α = 0,05) avec un ajustement de Bonferroni pour tenir compte des multiples points dans le temps. b–i Les données ont été comparées entre les deux groupes de traitement à l'aide du test de somme des rangs de Wilcoxon avec ajustement de Bonferroni pour tenir compte des multiples points dans le temps. b Pliez les variations des IgG totales spécifiques à ID93 dans le sérum par rapport à la ligne de base, telles que mesurées par ELISA. **p = 0,0023 (jour d'étude 70), *p = 0,0495 (jour d'étude 84). c Tracé longitudinal du groupe MEPT pour les IgG totales spécifiques à ID93 dans le sérum, telles que mesurées par ELISA. **p = 0,0061. d–g Tracés longitudinaux des sous-classes d'IgG spécifiques au groupe MEPT ID93 dans le sérum, mesurés par ELISA. d IgG1. **p = 0,0032 (jour d'étude 70), **p = 0,0040 (jour d'étude 84). e IgG2. f IgG3. gIgG4. h Dénombrement des cellules sécrétant des IgG spécifiques à ID93 dans les échantillons de PBMC, tel que mesuré par le test ELISpot. **p = 0,0085. i Dénombrement des cellules B mémoire IgG spécifiques à ID93 dans les échantillons de PBMC, mesuré par le test ELISpot. Les valeurs moyennes sont représentées par des symboles et les barres d'erreur indiquent l'IC à 95 % sur la moyenne. Les astérisques indiquent une différence statistiquement significative (*p < 0,05, **p < 0,01) entre les groupes de traitement à ce moment après correction pour les comparaisons multiples. Les données source sont fournies sous la forme d'un fichier de données source.

Les cellules sécrétant des anticorps IgG spécifiques à ID93 dans les échantillons de PBMC ont été évaluées par immunospot lié à une enzyme (ELISpot) les jours d'étude 0, 7, 56 et 63. Bien que les réponses soient restées proches des niveaux de base pour la plupart des points dans le temps dans les deux groupes de traitement, une l'augmentation du nombre de cellules sécrétant des anticorps IgG spécifiques à ID93 dans le groupe de vaccin thermostable à flacon unique a été mesurée au jour 63 de l'étude, tandis que la réponse dans le groupe de vaccin non thermostable à deux flacons est restée faible (Fig. 2h). Les cellules B mémoire IgG spécifiques à ID93 dans les échantillons de cellules mononucléaires du sang périphérique (PBMC) ont également été mesurées par ELISpot les jours d'étude 0, 56, 84 et 224. Les cellules B mémoire IgG ont semblé augmenter dans les deux groupes de traitement 4 semaines après le deuxième injection, mais les réponses étaient revenues aux niveaux de base au jour d'étude 224 (Fig. 2i). Ainsi, conformément au schéma évident dans les réponses d'IgG sériques décrites précédemment, la présentation de vaccin thermostable à flacon unique a augmenté de manière significative les plasmocytes sécrétant des IgG spécifiques à ID93 par rapport à la présentation à deux flacons non thermostables après la deuxième immunisation.

Les réponses IgA spécifiques à ID93 de la muqueuse ont été évaluées par ELISA à l'aide d'écouvillons nasaux et d'échantillons de larmes aux jours 0, 70 et 224 de l'étude. Supplémentaire Fig. 2a, b). De même, les cellules sécrétant des anticorps IgA spécifiques à ID93 et ​​les cellules B mémoire IgA dans les échantillons de PBMC n'ont pas augmenté de manière significative au-dessus des niveaux de référence (Fig. 2c, d supplémentaires). Ainsi, aucun groupe de traitement n'a semblé susciter des réponses d'anticorps IgA spécifiques de l'antigène dans les échantillons de muqueuse ou dans les PBMC.

Pour quantifier le nombre de cellules sécrétant des cytokines IFN-γ et IL-10 dans les échantillons de PBMC en réponse à ID93, des tests ELISpot ont été effectués sur des échantillons prélevés les jours d'étude 0, 14, 56, 70, 84 et 224. IFN-γ les taux de réponse, basés sur l'analyse MIMOSA, ont culminé après la deuxième injection à 70–76 % au jour 70 de l'étude pour les deux groupes de traitement (Fig. 3a). Au jour d'étude 224, les taux de réponse à l'IFN-γ variaient de 53 à 65 % (Fig. 3a). Les participants des deux groupes de traitement ID93 + GLA-SE ont développé des réponses de rappel robustes de PBMC IFN-γ spécifiques à ID93, mesurées par le nombre total de SFU par million de PBMC produisant de l'IFN-γ (tableau supplémentaire 2 et figure 3b). Ces réponses se sont maintenues pendant 6 mois après la dernière vaccination dans les deux régimes. D'autre part, une faible réactivité à ID93 a été observée dans les cellules productrices d'IL-10 (tableau supplémentaire 3 et figures 3c, d). Ce modèle d'augmentation du nombre de cellules excrétant de l'IFN-γ et de faibles niveaux de cellules excrétant de l'IL-10 est indicatif d'une réponse immunitaire de type Th1. Une comparaison des deux présentations de vaccins n'a montré aucune différence significative, bien que le format de vaccin thermostable à flacon unique ait eu tendance à susciter des réponses de plus grande ampleur. Les niveaux d'IFN-γ et d'IL-10 des PBMC stimulés par les pools de peptides de la sous-unité ID93 ont suivi des schémas similaires à ceux décrits ci-dessus pour les PBMC stimulés par ID93, mais à des amplitudes inférieures (Fig. 3 supplémentaire).

n = 16 à 25 échantillons biologiquement indépendants selon le groupe de traitement et le moment, voir les tableaux supplémentaires 2 à 4. un taux de réponse IFN-γ par test ELISpot utilisant des PBMC stimulés par ID93 et ​​calculé par MIMOSA comme un changement par rapport à la ligne de base en utilisant des SFU soustraites en arrière-plan. b Dénombrement des cellules sécrétant de l'IFN-γ stimulées par ID93 dans des échantillons de PBMC, telles que mesurées par le test ELISpot. c Taux de réponse IL-10 par test ELISpot utilisant des PBMC stimulés par ID93 et ​​calculé par MIMOSA en tant que changement par rapport à la ligne de base en utilisant des SFU soustraites en arrière-plan. d Dénombrement des cellules sécrétant de l'IL-10 stimulées par ID93 dans des échantillons de PBMC, telles que mesurées par le test ELISpot. e Taux de réponse par ICS des lymphocytes T CD4+ exprimant deux cytokines quelconques parmi CD154, TNF, IFN-γ, IL-2, IL-21 et IL-4 calculé par MIMOSA en tant que changement par rapport à la ligne de base en utilisant les fréquences et les nombres totaux soustraits au fond . f Fréquences des cellules T CD4 + stimulées par ID93 exprimant deux cytokines quelconques dans des échantillons de PBMC, telles que mesurées par ICS. g Phénotype des lymphocytes T CD4+ à cytokine unique et à cytokine polyfonctionnelle aux jours d'étude 70 et 84, tel que mesuré par ICS. Proportions de lymphocytes T CD4 + stimulés par ID93 exprimant différentes cytokines uniques et combinaisons de cytokines aux jours d'étude 70 et 84 représentées par des fréquences médianes. La zone du diagramme circulaire est proportionnelle aux fréquences médianes totales pour chaque lecture. a, c, e Les tracés des taux de réponse montrent les valeurs moyennes représentées par des symboles, et les barres d'erreur montrent l'IC à 95 % sur la moyenne. Les taux de réponse ont été comparés à l'aide du test exact de Fisher. Des différences ont été détectées sur la base d'un test bilatéral et p ≤ 0,05 (α = 0,05) avec des ajustements de Bonferroni pour tenir compte des multiples points dans le temps. b, d, f Les tracés de points représentent toutes les valeurs soustraites au fond sous forme de symboles, avec des lignes pleines représentant les valeurs médianes et des barres d'erreur représentant la plage interquartile. Les données ont été comparées entre les deux groupes de traitement à l'aide du test de somme des rangs de Wilcoxon avec ajustement de Bonferroni pour tenir compte des multiples points dans le temps. Les données source sont fournies sous la forme d'un fichier de données source.

Le pourcentage de cellules T CD4 + et CD8 + produisant deux cytokines ou plus en réponse à ID93 a été mesuré par coloration intracellulaire des cytokines (ICS) avec cytométrie en flux à l'aide d'échantillons de PBMC collectés les jours d'étude 0, 7, 14, 56, 63, 70, 84, et 224. Le taux de réponse et les fréquences des lymphocytes T CD4+ spécifiques à l'antigène exprimant Deux ou plusieurs cytokines (c'est-à-dire, des cellules exprimant deux ou plusieurs marqueurs immunitaires parmi IFN-γ, TNF, IL-2, IL-4, et CD154) ont été calculés en utilisant les valeurs de fond soustraites. Des réponses des lymphocytes T CD4 + spécifiques à ID93 ont été observées avec les deux présentations vaccinales (tableau supplémentaire 4 et figures 3e, f). Les taux de réponse maximaux (analysés par MIMOSA) se sont produits au jour 70 de l'étude dans les deux groupes de traitement (38 à 59 %) (Fig. 3e). Les taux de réponse ont persisté à 26–31 % au jour de l'étude 224, 6 mois après la dernière injection de l'étude (Fig. 3e). L'analyse des profils de cytokines simples et combinées de cellules T spécifiques à ID93 a indiqué que les fréquences d'expression les plus élevées étaient attribuables à l'IFN-γ, au TNF et / ou à l'IL-2, avec une faible réponse à l'IL-4 (Fig. 3g). Alors que la formulation de vaccin thermostable avait tendance à provoquer une fréquence médiane plus élevée de réponse au TNF, les deux présentations de vaccin induisaient une réponse immunitaire polyfonctionnelle et biaisée en Th1. Cependant, des impacts minimes ont été observés de l'un ou l'autre des traitements sur les fréquences de réponse spécifiques à ID93 des lymphocytes T CD8 + (Fig. 4d supplémentaire et Tableau supplémentaire 5). En résumé, alors que les différences dans les lectures individuelles n'étaient pas statistiquement significatives, la présentation du vaccin thermostable présentait une tendance globale à des fréquences de réponse des cytokines des lymphocytes T CD4+ plus élevées par rapport à la présentation du vaccin non thermostable.

La fréquence d'autres sous-types de lymphocytes T, y compris les cellules auxiliaires folliculaires T (Tfh), les cellules mémoire effectrices T et les cellules mémoire centrales T, ainsi que d'autres cellules immunitaires, y compris les cellules tueuses naturelles (NK) et les cellules NK T, a été mesurée par ICS avec cytométrie en flux dans des échantillons de PBMC. Les deux traitements ont amélioré les fréquences des cellules mémoires centrales CD4 + T, mais pas les fréquences des cellules mémoires effectrices par rapport à la ligne de base (Fig. 4a, b supplémentaires). La présentation en flacon unique thermostable a également provoqué une augmentation modeste des fréquences des cellules Tfh au jour d'étude 63 par rapport à la valeur initiale (Fig. 4c supplémentaire). Cependant, des effets minimes ont été observés avec l'un ou l'autre des traitements sur les fréquences de réponse spécifiques à ID93 des cellules NK ou des cellules NK T (Fig. 4e, f supplémentaires).

Enfin, l'inhibition nette de la croissance mycobactérienne intracellulaire de chaque traitement a été mesurée à l'aide d'échantillons de sang total prélevés les jours d'étude 0, 70 et 224. Cependant, aucune présentation de vaccin n'a amélioré l'inhibition de la croissance mycobactérienne, comme indiqué par le temps de positivité (Figure 5 supplémentaire).

À notre connaissance, cette étude représente le premier candidat vaccin contre la tuberculose sous-unitaire thermostable à être évalué dans le cadre d'essais cliniques11,14. Pour d'autres indications de maladie, trois candidats vaccins sous-unitaires lyophilisés avec adjuvant sont entrés dans les essais cliniques, mais les résultats cliniques n'ont été publiés que pour un candidat sans évaluation de ses caractéristiques potentielles de thermostabilité15,16,17,18. Ainsi, le présent rapport représente une avancée majeure dans le domaine des candidats vaccins thermostables lyophilisés contenant un adjuvant. Notamment, certaines formulations de vaccins liquides aux propriétés thermostables ont progressé grâce aux essais cliniques et même à l'homologation, avec un impact bénéfique significatif en raison de leur profil de thermostabilité démontré sur le terrain11,19,20. Néanmoins, la stabilité de ces vaccins en dehors des températures réfrigérées est généralement limitée à quelques jours ou quelques semaines, alors que la présentation thermostable en flacon unique ID93 + GLA-SE est stable pendant 3 mois à 37 °C12,13.

Les objectifs spécifiques de l'essai de phase 1 actuel étaient d'évaluer l'innocuité et l'immunogénicité d'une présentation à flacon unique thermostable du candidat vaccin ID93 + GLA-SE par rapport à la présentation à deux flacons non thermostable précédemment développée. Les profils d'innocuité démontrés ici pour les deux présentations vaccinales étaient cohérents avec la réactogénicité généralement légère évidente dans les essais cliniques précédents de la présentation vaccinale à deux flacons8,21,22. La douleur au site d'injection était l'EI le plus courant, et aucun EI ou EIG de grade 3 ou 4 n'a été identifié pour l'une ou l'autre des présentations vaccinales. Ainsi, la présentation du vaccin thermostable a maintenu l'excellent profil d'innocuité du candidat vaccin non thermostable ID93 + GLA-SE.

Une réponse des lymphocytes T de type Th1 est considérée comme favorable à la protection contre Mycobacterium tuberculosis (M. tuberculosis)23. Il a déjà été démontré que la présentation ID93 + GLA-SE à deux flacons non thermostables induisait des réponses IgG spécifiques à l'antigène et des lymphocytes T CD4 + de type Th18,21,22. Les résultats d'immunogénicité rapportés ici pour les deux présentations de vaccins étaient cohérents avec ce profil, y compris les lymphocytes T CD4+ polyfonctionnels exprimant l'IFN-γ, le TNF et l'IL-2. Cependant, plusieurs lectures utilisées dans l'essai actuel n'avaient pas été incluses dans les évaluations cliniques précédentes de ID93 + GLA-SE, y compris les ELISA d'anticorps de sécrétion muqueuse, le test d'inhibition de croissance de M. tuberculosis sur le sang total et le dénombrement ELISpot des lymphocytes T et Cellules B. Alors qu'un impact minimal était apparent de l'une ou l'autre des présentations vaccinales sur les réponses des anticorps muqueux ou sur l'inhibition de la croissance de M. tuberculosis dans le sang total, le dénombrement basé sur ELISpot des cellules productrices de cytokines dans les échantillons de PBMC stimulés par ID93 a indiqué que les deux présentations de ID93 + GLA-SE a suscité une réponse IFN-γ robuste et une faible réponse IL-10, ce qui est cohérent avec la qualité de la réponse de type Th1 évidente dans les données ICS des essais actuels et précédents. Il est intéressant de noter qu'une tendance globale des réponses maximales des cellules T de magnitude plus élevée a été observée dans le groupe de traitement thermostable à flacon unique par rapport au groupe de traitement non thermostable.

Bien que les réponses des lymphocytes B et des anticorps ne soient pas suffisantes pour une efficacité protectrice contre la tuberculose, leurs multiples rôles complémentaires dans l'immunité médiée par les lymphocytes T sont de plus en plus appréciés, et davantage d'investigations cliniques sont justifiées à cet égard24,25,26. Remarquablement, la présentation thermostable du vaccin à flacon unique a suscité significativement plus d'IgG et d'IgG1 spécifiques de l'antigène dans le sérum prélevé 2 à 4 semaines après la deuxième immunisation que la présentation non thermostable à deux flacons. De plus, le dénombrement des cellules sécrétant des IgG spécifiques à ID93 dans les échantillons de PBMC a révélé une réponse robuste 1 semaine après la deuxième immunisation pour la présentation du vaccin à flacon unique thermostable, mais pas pour la présentation à deux flacons non thermostable. Il n'est pas clair comment attribuer spécifiquement les différences inattendues dans l'ampleur des réponses immunitaires entre les groupes de traitement. Un MEPT de base plus élevé pourrait avoir un impact sur les calculs du facteur de variation post-vaccination, mais cela n'explique pas les différences dans les valeurs absolues du MEPT. Bien que chaque groupe de traitement ait reçu la même dose d'antigène et d'adjuvant, d'autres facteurs, notamment la composition de l'excipient, la date de fabrication et les procédés de fabrication, différaient nécessairement.

Les multiples tests immunologiques, les types d'échantillons et les points temporels utilisés dans cette étude représentent l'évaluation clinique la plus complète de l'immunogénicité du candidat vaccin ID93 + GLA-SE chez les adultes en bonne santé à ce jour. Néanmoins, l'étude présentait plusieurs limites, notamment l'absence de groupes de traitement par placebo, mais ceux-ci ont été jugés inutiles en raison d'une évaluation clinique antérieure de ID93 + GLA-SE par rapport à ID93 seul ou à un placebo salin8,22. D'autres limites incluent qu'il n'existe aucun corrélat immunitaire établi de protection contre la tuberculose et que les participants n'ont pas été vaccinés par le BCG ou pré-exposés à M. tuberculosis. Ainsi, il n'est pas possible de prédire comment le profil d'immunogénicité de ID93 + GLA-SE, et en particulier les réponses améliorées suscitées par la formulation de vaccin thermostable, se traduirait par des impacts sur l'efficacité protectrice. Enfin, cette étude a également recruté principalement des femmes blanches, ce qui rend difficiles les extrapolations à d'autres populations à forte charge de morbidité tuberculeuse.

L'impact de la formulation thermostable à flacon unique d'ID93 + GLA-SE sur l'évolutivité et le coût de la fabrication de vaccins est une autre considération importante. Nous estimons que le coût de l'excipient dans la présentation thermostable serait d'environ 0,15 $ de plus par dose que la composition non thermostable à l'échelle commerciale. De plus, des coûts supplémentaires seraient associés au temps de traitement de la lyophilisation de plusieurs jours. Cependant, ces coûts accrus pourraient être atténués par les économies de coûts anticipées et la réduction du gaspillage associée aux exigences de stockage moins strictes de la formulation thermostable par rapport à la présentation non thermostable. De plus, la lyophilisation est déjà une technique de traitement pharmaceutique bien établie qui est employée dans la production de nombreux vaccins homologués.

En résumé, cette évaluation clinique de phase 1 a indiqué que la présentation thermostable à flacon unique d'ID93 + GLA-SE induit un profil d'innocuité similaire et un profil d'immunogénicité comparable ou amélioré à la présentation de vaccin non thermostable à deux flacons. Un vaccin antituberculeux thermostable efficace aurait des implications majeures pour l'impact sur la santé mondiale. En outre, cette étude démontre la preuve de concept qu'un vaccin contenant un adjuvant peut être formulé dans une présentation thermostable à flacon unique sans impact négatif sur l'immunogénicité clinique ou les caractéristiques de sécurité.

Cette étude était un essai clinique de phase 1, randomisé, en double aveugle, conçu pour évaluer l'innocuité, la tolérabilité et l'immunogénicité de l'ID93 lyophilisé thermostable à flacon unique + GLA-SE par rapport à la présentation à deux flacons non thermostables composée d'ID93 lyophilisé et GLA-SE liquide administré en deux injections IM chez des participants adultes en bonne santé. L'étude a été réalisée dans le cadre d'un nouveau médicament expérimental (IND) avec la Food and Drug Administration (FDA) des États-Unis, et le protocole, le formulaire de consentement éclairé et d'autres documents d'étude ont été approuvés par le comité d'examen institutionnel de l'Université de Saint Louis. L'essai clinique est enregistré sur ClinicalTrials.gov sous l'identifiant NCT03722472.

L'étude a été menée sur un seul site (Saint Louis University Center for Vaccine Development à St. Louis, MO) et a recruté des participants de St. Louis, Missouri, et des environs. Un total de 48 participants masculins et féminins âgés de 18 à 55 ans et en bonne santé générale ont été inscrits, comme prévu par le protocole d'étude (informations supplémentaires). Les participants ont été conseillés sur l'étude et ont subi le processus de consentement éclairé. Le dépistage comprenait une évaluation des antécédents médicaux, des antécédents de médication, un examen physique, des tests de sécurité en laboratoire et une analyse d'urine. Les critères d'inclusion et d'exclusion complets sont indiqués dans les informations supplémentaires (protocole d'étude). Les critères d'éligibilité comprenaient des hommes et des femmes en bonne santé âgés de 18 à 55 ans avec un virus de l'immunodéficience humaine (VIH) négatif, un antigène de surface de l'hépatite B (AgHBs) et un virus de l'hépatite C (VHC), et aucun antécédent de vaccination par le BCG. Les participants qui remplissaient tous les critères d'éligibilité ont été randomisés 1:1 en deux groupes de traitement. Les injections de l'étude ont été effectuées les jours 0 et 56 de l'étude. La sécurité générale a été évaluée les jours 0, 7, 56, 63 et 84 pour chaque participant. Le sang a été évalué pour des analyses de laboratoire de sécurité (hématologie et chimie sérique) le jour du dépistage et les jours d'étude 7 et 63. Tous les participants ont rempli un aide-mémoire écrit qui sollicitait des EI de réactogénicité locale et systémique pendant 7 jours après chaque injection d'étude. Les EI non sollicités ont été enregistrés jusqu'au jour 84 de l'étude (28 jours après la dernière injection de l'étude). La survenue d'EIG et l'apparition de tout PIMMC ont été enregistrées tout au long de la période d'étude (environ 421 jours). L'immunogénicité a été évaluée le jour 0 de l'étude (pré-dose) et les jours 7, 14, 56, 63, 70, 84 et 224 de l'étude. Les participants ont reçu une indemnisation de 75 $ par visite d'étude et de 10 $ par visite téléphonique.

La taille de l'échantillon de 48 participants a été déterminée par ce qui est raisonnable pour un essai de phase 1 et ne permet que des informations préliminaires sur l'innocuité et l'immunogénicité pertinentes pour la progression vers des essais plus importants. Sur la base de l'expérience clinique antérieure avec la présentation non thermostable de ID93 + GLA-SE, nous avons estimé qu'un échantillon de 24 participants par groupe permettrait de détecter une augmentation de la fréquence des effets indésirables systémiques de> 32,5 % dans le groupe de présentation thermostable. par rapport au groupe de présentation non thermostable à une puissance de 80 % avec un intervalle de confiance unilatéral de 95 %, et détection d'une diminution du taux de réponse des anticorps sériques de> 10 % dans le groupe de présentation thermostable par rapport au groupe de présentation non thermostable à une puissance de 90 % avec un intervalle de confiance unilatéral de 95 %. Cette étude incluait tous les adultes en bonne santé qui répondaient aux critères d'inclusion/exclusion, quel que soit leur sexe. Le sexe a été déterminé sur la base de l'auto-déclaration. Aucune analyse basée sur le sexe ou le genre n'a été effectuée car l'étude n'a pas été conçue avec une puissance suffisante pour traiter adéquatement cet aspect. Les principaux critères d'évaluation comprenaient (1) le nombre de participants ayant subi des réactions sollicitées au site d'injection locale dans les 7 jours suivant chaque injection à l'étude, (2) le nombre de participants ayant subi des réactions systémiques sollicitées dans les 7 jours suivant chaque injection à l'étude, (3) le nombre de participants signalant spontanément des EI du jour d'étude 0 au jour d'étude 84, et (4) le nombre d'EI considérés comme liés à l'une des injections de l'étude signalées à tout moment pendant la période d'étude. Les critères d'évaluation secondaires comprenaient (1) la proportion de participants avec une augmentation d'au moins 4 fois des réponses d'anticorps IgG à ID93 aux jours d'étude 14, 56, 70, 84 et 224 par rapport à la ligne de base (jour d'étude 0) comme testé par ELISA ; (2) changement de facteur moyen par rapport au départ dans les réponses d'anticorps IgG à ID93 aux jours d'étude 14, 56, 70, 84 et 224 par rapport au départ (jour d'étude 0) tel que testé par ELISA ; (3) le nombre de cellules sécrétant des cytokines IFN-γ et IL-10 dans les échantillons de PBMC en réponse à ID93 aux jours d'étude 14, 56, 70, 84 et 224 par rapport à la ligne de base (jour d'étude 0) tel qu'analysé par ELISpot ; et (4) le pourcentage de lymphocytes T CD4+ et CD8+ produisant deux cytokines ou plus en réponse à ID93, tel que mesuré par ICS avec cytométrie en flux des PBMC aux jours d'étude 0, 7, 14, 56, 63, 70, 84 et 224. Les critères d'évaluation exploratoires comprenaient (1) les réponses des anticorps de la sous-classe IgG à ID93 aux jours d'étude 0, 14, 56, 70, 84 et 224 ; (2) inhibition nette de la croissance intracellulaire de M. tuberculosis en utilisant du sang total aux jours d'étude 0, 70 et 224 ; (3) réponses d'anticorps IgA à ID93 dans les sécrétions muqueuses (écouvillons nasaux et collections de larmes) telles que mesurées par ELISA aux jours d'étude 0, 70 et 84 ; (4) nombre de cellules sécrétant des anticorps dans les PBMC tel que dosé par ELISpot de cellules B à culture courte aux jours d'étude 0, 7, 56 et 63 ; (5) le nombre de lymphocytes B mémoire spécifiques à l'antigène dans les PBMC, tel que dosé par ELISpot de lymphocytes B à culture longue aux jours d'étude 0, 56, 84 et 224 ; et (6) le pourcentage de cellules Tfh et de marqueurs de localisation des cellules T dans les PBMC, mesuré par cytométrie en flux immunophénotypique aux jours d'étude 0, 7, 14, 56, 63, 70, 84 et 224.

Les participants ont été recrutés par randomisation en deux groupes de traitement selon les étapes suivantes. Un journal principal de tous les participants sélectionnés a été conservé. Lors de la sélection, les participants qui ont signé le formulaire de consentement éclairé et rempli tous les critères d'inclusion et aucun des critères d'exclusion ont été identifiés comme éligibles pour être enrôlés dans l'étude. Les participants éligibles ont reçu un numéro d'identification séquentiel lorsqu'ils se sont présentés à la clinique le jour de l'étude 0. Les statisticiens de DF/Net Research (Seattle, WA) ont généré la liste des affectations de traitement randomisées et l'ont incluse dans le module d'inscription du système de randomisation Web interactif. (IWRS), qui est intégré au logiciel DFexplore. Le coordinateur de l'étude ou la personne désignée sur le site clinique a effectué le recrutement et la randomisation à l'aide de DFexplore. La randomisation en bloc de taille appropriée a été utilisée pour équilibrer l'inscription dans un rapport de 1: 1 dans chacun des deux groupes. Une personne désignée sur le site de l'étude a reçu une clé de traitement, qui reliait le code de traitement à l'affectation réelle du traitement et était conservée dans un endroit sûr.

L'étude a été menée en double aveugle. Les participants, les enquêteurs, le personnel de l'étude effectuant toute évaluation liée à l'étude après l'injection de l'étude et le personnel de laboratoire effectuant des tests immunologiques n'ont pas été informés de l'attribution du traitement. Le schéma de randomisation de DF/Net Research a été fourni au personnel de l'étude non aveugle (c'est-à-dire, les pharmaciens du site réalisant les préparations des produits de l'étude et les administrateurs des produits de l'étude non aveugle).

ID93 est un antigène sous-unitaire recombinant et GLA-SE est une émulsion de squalène contenant l'agoniste synthétique du récepteur de type Toll 4, le glucopyranosyl lipide A (GLA)8,27. Il s'agissait du cinquième essai clinique dans lequel le vaccin ID93 + GLA-SE était administré à des participants humains, mais le premier pour la présentation en flacon unique thermostable (NCT01599897, NCT01927159, NCT02465216, NCT02508376 et NCT03722472). Les résultats d'un essai précédent ont éclairé la sélection de la dose (2 µg ID93 et ​​5 µg GLA-SE) et le calendrier de cet essai8. La présentation lyophilisée à flacon unique thermostable d'ID93 + GLA-SE a été développée et fabriquée comme décrit précédemment, y compris l'optimisation du contenu des excipients, l'ingénierie du processus de lyophilisation et la surveillance complète de la stabilité physicochimique et de la puissance12,13. Le flacon unique thermostable lyophilisé ID93 + GLA-SE a été reconstitué avec de l'eau stérile pour injection (WFI) avant l'administration. La présentation non thermostable à deux flacons a été préparée en reconstituant la protéine ID93 lyophilisée avec du WFI stérile et en mélangeant à 1:1 v:v avec du GLA-SE liquide avant administration. Pour la présentation à deux flacons, ID93 a été fabriqué par le Centre de biocatalyse et de biotraitement de l'Université de l'Iowa (CBB, Coralville, IA), et la lyophilisation a été réalisée par l'Université de l'Iowa Pharmaceuticals (Iowa City, IA). Le GLA-SE liquide a été fabriqué par l'Infectious Disease Research Institute (IDRI; Seattle, WA), maintenant l'Access to Advanced Health Institute (AAHI). Pour la présentation en flacon unique, les substances médicamenteuses en vrac ID93 et ​​GLA-SE ont été fabriquées respectivement au CBB et à l'IDRI, et le produit médicamenteux final a été fabriqué chez Lyophilization Technology, Inc (Warminster, PA). Tous les produits expérimentaux ont été fournis à l'investigateur (Daniel F. Hoft de l'Université Saint Louis) par le sponsor (IDRI). Les flacons d'ID93 + GLA-SE, ID93 et ​​GLA-SE ont été expédiés et stockés sur le site de l'étude à 2–8 °C ; la température pendant le transport et le stockage a été surveillée en permanence. WFI stérile a été fourni par le site d'étude.

La préparation du vaccin à l'étude, y compris les dilutions du vaccin et le mélange pour les deux groupes de dosage, a été effectuée par le pharmacien du site non aveugle en utilisant une technique aseptique le jour même de l'administration du vaccin à l'étude, mais pas plus de 2 h avant l'administration. Une fois reconstitué, le vaccin des deux groupes de traitement (présentations à un ou deux flacons) semblait identique. La personne désignée chargée d'administrer les injections de l'étude a reçu une seringue chargée étiquetée avec le numéro d'identification du participant et les données d'identification requises par l'hôpital. Le temps de préparation et le temps d'administration ont été notés dans la documentation source. Toutes les injections de l'étude avaient un volume de 0,5 ml et étaient administrées par voie intramusculaire dans le deltoïde du bras non dominant.

Tous les échantillons ont été collectés sur le site de l'étude, enregistrés et suivis (Centre de développement de vaccins de l'Université Saint Louis à St. Louis, MO). Les échantillons de sécurité ont été expédiés le même jour qu'une collection à Quest Diagnostics, anciennement LabOne (Lenexa, KS), pour traitement. Les échantillons d'immunologie pour les paramètres secondaires et exploratoires ont été traités à l'Université de Saint Louis. Les échantillons de sérum et de PBMC de chaque participant ont été stockés ici jusqu'à la fin de l'étude, moment auquel les échantillons ont été expédiés à Advanced Bioscience Laboratories (ABL Inc.; Rockville, MD) pour des dosages et des analyses en deux envois distincts afin d'atténuer le risque de perte d'échantillon en raison des écarts de température. Les PBMC ont été expédiés à l'aide d'expéditeurs secs chargés d'azote liquide, et les échantillons de sérum ont été expédiés sur de la neige carbonique.

Pour le test Mycobacteria Growth Indicator Tube (MGIT), le sang a été prélevé à l'aide de tubes stériles de prélèvement d'héparine sodique. Pour les tests d'hématologie de sécurité, le sang a été prélevé dans des tubes avec de l'EDTA. Pour obtenir des échantillons de sérum pour la chimie de sécurité et l'analyse des anticorps, le sang a été prélevé à l'aide de tubes séparateurs de sérum (SST). Pour l'analyse des anticorps, après centrifugation à 750–930 × g pendant 10–15 min à température ambiante, le surnageant a été recueilli. Des échantillons de sérum d'environ 500 µL chacun ont été divisés (en deux flacons primaires et deux flacons de secours), placés dans des cryoboîtes 9 × 9 pré-refroidies, immédiatement congelées à −70 °C ± 10 °C et stockées en position verticale à −70 °C ± 10 °C jusqu'à l'expédition à ABL.

Pour obtenir des échantillons de PBMC, le sang a été prélevé dans des tubes CPT de 8 ml (BD Biosciences, Franklin Lakes, NJ). Après centrifugation à 1800 × g pendant 30 min à température ambiante dans une centrifugeuse à tête pivotante à rotor horizontal, le plasma a été aspiré et la couche cellulaire a été recueillie du tube avec une pipette et transférée dans un tube à centrifuger conique. Les cellules ont ensuite été lavées et remises en suspension dans une solution saline tamponnée au phosphate (PBS). Les échantillons de PBMC ont ensuite été aliquotés à 8 × 106 dans 1 mL de milieu de congélation (sérum bovin fœtal (FBS) contenant 10 % de diméthylsulfoxyde (DMSO)) par cryotube. Les PBMC ont été congelés immédiatement dans des conteneurs CoolCell (Corning, Corning, NY) ou Mr. Frosty (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA) à -70 ° C ± 10 ° C. Les flacons de PBMC de chaque participant ont été distribués dans deux cryoboîtes 9 × 9 pré-réfrigérées séparées (principale et de secours) en position verticale dans un congélateur, puis déplacées dans un congélateur cryogénique à l'azote liquide ou à la phase vapeur en 1 semaine, et stockées là jusqu'à l'expédition à ABL.

Pour le prélèvement d'échantillons nasaux, le même écouvillon PurFlock stérile (Puritan Medical Products, Guilford, ME) a ​​été inséré dans chaque cavité nasale le long du septum nasal et tourné à 360 ° dans chaque direction en attendant 5 s après chaque rotation avant de retirer soigneusement l'écouvillon. Après avoir échantillonné les deux narines, l'embout de l'écouvillon a été placé dans 3 ml de tampon contenant du PBS de Dulbecco (DPBS) avec 5 mM d'acide l-glutamique et 10 % de saccharose (pH 7,2) dans un tube à centrifuger de 15 ml. Le bâtonnet applicateur d'écouvillon a été retiré, laissant l'écouvillon dans le tube. Les échantillons d'écouvillons nasaux ont été conservés sur de la glace humide ou dans un réfrigérateur à 2–8 °C jusqu'à 2 h jusqu'à congélation. Les échantillons ont été congelés à -70 °C ± 10 °C et conservés à cette température pendant au moins 24 h mais pas plus d'un mois jusqu'au traitement. Le traitement de l'échantillon consistait à vortexer le tube pendant 1 min, puis à presser l'écouvillon contre le côté du tube avant de le retirer. L'échantillon restant a ensuite été aliquoté dans des cryotubes et stocké à -70 ° C ± 10 ° C jusqu'à l'analyse à l'Université Saint Louis.

Des échantillons de larmes ont été prélevés en pressant d'abord un zeste d'orange directement sur l'œil du participant. Le participant a ensuite cligné des yeux plusieurs fois jusqu'à ce que des larmes soient générées. Les larmes (volume cible 125 µL) ont été collectées à l'aide d'un tube capillaire drainé dans un microtube de collecte à bouchon vissé. L'œil affecté a ensuite été irrigué avec une solution de lavage oculaire et une solution de collyre commerciale. Les échantillons de larmes ont été maintenus sur de la glace humide jusqu'à 2 h avant d'être traités par centrifugation à 20 000 × g pendant 5 min à ~ 4 ° C. Le surnageant a été recueilli en aliquotes de 15 µL, placé dans des flacons de stockage de 0,5 mL et stocké à -70 °C ± 10 °C jusqu'à l'analyse à l'Université Saint Louis.

La survenue de tous les EI a été enregistrée jusqu'au jour d'étude 84, tandis que les EIG et les PIMMC ont été surveillés jusqu'au jour d'étude 421. Les EI ont été classés par gravité (c. , peut-être, probablement ou définitivement liés) selon les définitions fournies dans le protocole d'étude (informations supplémentaires). À des fins de déclaration, conformément aux directives du National Institute of Allergy and Infectious Diseases (NIAID), les EI certainement, probablement et éventuellement liés ont été considérés comme liés à l'injection de l'étude. Les EI non liés ont été considérés comme non liés. Un EIG a été défini comme tout EI qui a entraîné la mort, a été considéré comme mettant la vie en danger, a nécessité une hospitalisation ou une prolongation de l'hospitalisation, a entraîné une invalidité/incapacité persistante ou importante, ou a entraîné une anomalie congénitale/anomalie congénitale chez la progéniture d'un participant à l'étude .

Les réactions locales au site d'injection ont été évaluées le jour de l'injection de l'étude (avant l'injection et 60 minutes après l'injection) et pendant 7 jours après l'injection de l'étude en graduant la douleur, l'érythème et l'induration. Les réactions systémiques sollicitées ont été définies comme la survenue de maux de tête, d'arthralgies, de frissons, d'une perte d'appétit, de fièvre, de fatigue et/ou de myalgies dans les 7 jours suivant chaque injection à l'étude. Ces symptômes ont été caractérisés en grade 1 (léger), grade 2 (modéré) ou grade 3 (sévère). Des livrets d'aide-mémoire ont été distribués à chaque participant pour recueillir des informations sur les AE locaux et systémiques couvrant la période de 7 jours suivant chaque injection de l'étude. Tous les participants ont été invités à enregistrer la température buccale et les signes et symptômes locaux et généraux sur des aide-mémoire individuels le soir du jour de l'injection et à peu près à la même heure tous les jours pendant les 6 jours suivant les injections de l'étude. L'érythème et l'induration au site d'injection ont été mesurés et classés à l'aide de l'outil de mesure fourni. Les participants ont également été invités à enregistrer tous les médicaments pris. L'aide-mémoire a été apporté à la clinique lors de la visite prévue 7 jours après chaque injection pour examen et a été récupéré par le personnel de recherche de l'étude les jours d'étude 7 et 63. L'aide-mémoire était un outil pour aider l'investigateur et/ou la personne désignée à s'engager en conversation avec le participant au sujet de tout EI qui aurait pu survenir après les injections.

Le pouls, la température orale, la fréquence respiratoire et la pression artérielle systolique et diastolique ont été évalués les jours d'étude 0, 7, 56, 63 et 84. Des tests de sécurité en laboratoire (hématologie et chimie sérique) ont été effectués 7 jours après chaque injection. Les changements dans les signes vitaux ou les valeurs des tests de laboratoire répondant au grade 1 ou supérieur ont été enregistrés comme des EI. Des tests de grossesse urinaires ont été effectués dans la clinique de l'étude à l'aide d'un test commercial. Une sérologie pour le VIH, l'HBsAg, le VHC et le QuantiFERON-TB Gold a été réalisée lors du dépistage. Des tests de laboratoire de suivi non programmés ont été effectués à la discrétion du clinicien de l'étude. Tous les tests sérologiques, hématologiques et chimiques ont été effectués chez Quest Diagnostics.

Cet essai clinique a utilisé un comité de surveillance de la sécurité (SMC) pour surveiller la sécurité des sujets et étudier les critères d'arrêt. Le SMC s'est réuni un an après le début de l'essai pour examiner l'état actuel de l'étude et discuter du rapport de synthèse sur l'innocuité à ce jour. Aucun problème de sécurité important n'a été identifié à ce moment-là. Par conséquent, le SMC a recommandé que l'étude se déroule comme prévu sans aucun changement.

Toutes les évaluations d'immunogénicité sur les échantillons de sérum et de PBMC ont été réalisées par ABL. Des ELISA sériques ont été réalisées à l'aide de plaques ELISA à 384 puits à liaison élevée revêtues pendant 2 h à température ambiante avec des protéines ID93 purifiées ou des sous-unités (RV1813, RV2608, RV3619 ou RV3620), chacune à 1 µg par mL. Les plaques ont ensuite été lavées trois fois à l'aide du tampon de lavage A (Teknova, Hollister, CA) et bloquées pendant 4 h à température ambiante avec un tampon de blocage (albumine de sérum bovin à 1 % p/v et polysorbate 20 à 0,05 % p/v dans du PBS ). Le tampon de blocage a ensuite été jeté et des échantillons ont été ajoutés à chaque puits. Le sérum de contrôle a été dilué quatre fois, en commençant par une dilution initiale de 1:100 dans 0,1 % de BSA avec 0,05 % de polysorbate 20 dans du PBS, ajouté aux puits appropriés et incubé pendant une nuit à 4 oC. Les plaques ont ensuite été lavées sept fois avant d'ajouter des anticorps secondaires conjugués à la peroxydase de raifort (HRP) (voir les notes supplémentaires pour les anticorps et les dilutions spécifiques) dans les puits appropriés conformément à l'ELISA spécifique en cours d'exécution et incubées pendant 1 h à température ambiante. Les plaques ont ensuite été lavées sept fois, développées par colorimétrie en ajoutant un substrat de peroxydase SureBlue TMB (Kirkegaard & Perry Laboratories [KPL], Gaithersburg, MD), incubées pendant environ 10 min à température ambiante et arrêtées avec de l'acide sulfurique 1 N. Les densités optiques (DO) ont été quantifiées à 450 et 570 nm à l'aide d'un lecteur de plaques (Molecular Devices). Les données OD soustraites (450–570 nm) ont été utilisées pour effectuer des analyses de données ultérieures. Les titres au point final ont été calculés en effectuant un ajustement des moindres carrés des valeurs de DO à chaque dilution à une courbe sigmoïdale des moindres carrés à quatre paramètres. Les valeurs seuils ont été calculées comme la moyenne des sérums témoins négatifs à toutes les dilutions plus six fois ou trois fois l'écart type selon l'isotype d'anticorps. Les échantillons avec des valeurs de DO inférieures au seuil se sont vu attribuer un titre final de 1,699, représentant la transformation logarithmique de 0,5 fois la dilution la plus faible.

Des ELISA d'immunoglobuline A sécrétoire (sIgA) ont été réalisées avec un écouvillon nasal et des échantillons de larmes prélevés les jours d'étude 0, 70 et 22428. Pour l'ELISA sIgA spécifique à l'antigène, les plaques Immulon 2 ont été recouvertes de 1 µg par ml de protéine ID93 purifiée (AAHI , Seattle, WA) dilué dans du PBS et incubé pendant une nuit à 4 °C, 5 % de CO2. Les plaques ont ensuite été lavées avec du PBS plus 0, 05% de polysorbate 20 et bloquées avec 1% de BSA dans du PBS pendant environ 1 h à 37 ° C. Après le blocage, les plaques ont été lavées, des écouvillons nasaux et des échantillons de larmes ont été ajoutés à des puits en double à des dilutions optimales prédéterminées pour chaque type d'échantillon, et les plaques ont été incubées pendant une nuit à 4 ° C. Les plaques ont ensuite été lavées avec du PBS plus 0,05 % de polysorbate 20 et, avec l'ajout d'IgA anti-humaine de chèvre purifiée conjuguée à la biotine (Cat # 5260-0027, KPL, Seracare Life Sciences) à une dilution de 500 fois, ont été incubées pendant 1,5 h à température ambiante à l'abri de la lumière. Après l'incubation, les plaques ont été lavées avec du PBS plus 0, 05% de polysorbate 20, de la streptavidine marquée à la phosphatase (KPL) a été ajoutée et les plaques ont été incubées pendant 1, 5 h à température ambiante, à l'abri de la lumière. À la fin de l'incubation, une solution de substrat pNPP (comprimés de phosphate de p-nytrophényle SIGMAFAST, MilliporeSigma) a été préparée, puis les plaques ont été lavées avec du PBS plus 0, 05% de polysorbate 20, et la solution de substrat a été ajoutée. Les plaques avec la solution de substrat ont été incubées pendant 50 min (à température ambiante et à l'abri de la lumière), une solution d'arrêt AP (KPL) a été ajoutée et l'absorbance a été lue à une double longueur d'onde 405/550. L'ELISA sIgA total a été réalisée selon le protocole du kit ELISA IgA (Human) (Abnova, Taipei, Taiwan; #KA2110).

L'ICS a été réalisée selon les procédures suivantes. Les PBMC des participants à l'étude ont été décongelés et reposés dans du milieu R10 (RPMI 1640 avec 10 % de FBS, 1 % de l-glutamine et 1 % de pénicilline-streptavidine) à une concentration maximale de 2 × 106 cellules par ml pendant une nuit à 37 °C et 5 %CO2. Les PBMC ont ensuite été remis en suspension à une concentration de 10 × 106 cellules par ml et distribués de manière à ce que 1 × 106 cellules par ml soient stimulées chacune avec 0,25 μg par ml d'entérotoxine staphylococcique B (SEB) ou 10 μg par ml ID93 ou 0,3% DMSO, et un cocktail de co-stimulation CD28/CD49d a également été ajouté à chacun. Après avoir incubé les PBMC pendant 2 h à 37 ° C et 5% de CO2, 1X brefeldine A a été ajouté pour retenir les protéines sécrétoires (par exemple, les cytokines et les interleukines) de manière intracellulaire. L'activation s'est poursuivie pendant 10 h supplémentaires à 37 ° C et 5 % de CO2 avec des cellules incubées dans un sac en plastique scellé contenant une serviette humide. Le nombre de cellules et le pourcentage de viabilité ont été surveillés à l'aide du cytomètre en flux Guava EasyCyte (Luminex, Austin, TX). Les cellules ont ensuite été colorées en plusieurs étapes pour détecter les cibles partitionnées par région/zone. Les cellules ont été colorées séparément : d'abord avec une dilution de 500 fois du colorant de viabilité (Human CD14 BV510, Cat# 301842, BioLegend) pendant 20 min à température ambiante, suivi de 5 µg par mL de bloc Fc humain pendant 10 min à température ambiante (protégé de lumière), puis avec un cocktail marqueur de surface extracellulaire pendant 20 min à température ambiante. Une liste complète des anticorps et des dilutions et autres réactifs utilisés se trouve dans les notes supplémentaires. Ensuite, les cellules ont été perméabilisées et fixées avec BD CytoFix/CytoPerm (BD Biosciences) pendant 10 min à température ambiante (à l'abri de la lumière), suivies de lavages au tampon 1X Perm/Wash. Enfin, les cellules ont été colorées avec un cocktail de marqueurs intracellulaires pendant 30 min à température ambiante (à l'abri de la lumière), fixées avec 1X BD Stabilizing Fixative pendant 20 min à température ambiante et analysées dans les 16 h suivant la coloration sur le cytomètre en flux BD LSRFortessa. Les données sur le nombre et les fréquences de la population cellulaire ont été collectées à l'aide du logiciel FlowJo v10.8.1 (BD Biosciences).

Un test ELISpot à court terme sur les cellules B a été effectué pour détecter la fréquence des cellules sécrétant des anticorps en circulation. Les plaques ont été activées avec de l'alcool à 35 %, en recouvrant les puits appropriés avec l'antigène de capture ID93 ou l'anticorps de capture IgG/IgA (Clone MT91/145, Cat# 3850-3-1000, ou Clone MT57, Cat# 3860-3-1000, respectivement, MabTech) à une dilution de 100 fois et incubé une nuit à 4 °C. Les plaques ont ensuite été bloquées à l'aide de milieux R10. Les PBMC ont été décongelées, incubées pendant 2 h à 37 °C et 5 % de CO2 et comptées avant l'ensemencement dans les puits bloqués (5 × 105 cellules par puits pour ID93 ou 1 × 105 cellules par puits pour IgG/IgA). Les cellules ont été cultivées pendant 18 à 22 h à 37 °C et 5 % de CO2. Les plaques ont ensuite été lavées, incubées avec des anticorps de détection anti-IgG ou anti-IgA (Clone MT78/145, Cat# 3850-6-250, ou Clone MT20, Cat# 3860-6-250, respectivement, MabTech) à 500 fois dilution pendant 2 h à température ambiante, lavé, incubé avec un anticorps secondaire anti-biotine streptavidine-phosphatase alcaline (AP) (Cat# 3310-9-1000, MabTech) pendant 1 h à température ambiante, lavé et enfin développé à l'aide de nitro- bleu tétrazolium/5-bromo-4-chloro-3'-indolyphosphate (NBT/BCIP) pendant 7 min à température ambiante avant d'arrêter avec de l'eau distillée. Dans les 2 jours suivant le développement, les plaques ont été numérisées, comptées et soumises à un contrôle de qualité à l'aide de l'analyseur ImmunoSpot (Cellular Technology Limited, Cleveland, OH).

Un test ELISpot de cellules B à long terme pour détecter les cellules B mémoire a été effectué en suivant les mêmes procédures décrites ci-dessus, sauf que les PBMC ont d'abord été cultivées pendant 3 jours avec du milieu R10 complété par du résiquimod/IL-2 de cellules B polyclonales B-Poly-S humaines. stimulateur (Cellular Technology Limited) puis étalées (2 × 105 cellules par puits pour ID93 ou 5 × 104 cellules par puits pour IgG/IgA) et développées respectivement les 4e et 5e jours.

Les dosages ELISpot IFN-γ et IL-10 T cell ont été effectués selon les procédures suivantes. Les plaques ont été activées avec 35 % d'alcool, les plaques de revêtement avec des anticorps de capture contre l'IFN-γ ou l'IL-10 (Clone 1-D1K, Cat # 3420-3-250 ou Clone 9D7, Cat # 3430-3-250, respectivement, MabTech) à une dilution de 100 fois et incubé une nuit à 4 °C. Les PBMC de l'échantillon d'étude et le cytomégalovirus, le virus d'Epstein-Barr, le virus de la grippe et les PBMC de contrôle des donneurs de toxine tétanique (CEFT) ont été décongelés, comptés et incubés pendant la nuit à 37 ° C et 5 % de CO2. Les plaques ont ensuite été bloquées en ajoutant du milieu R10 et stockées pendant 2 à 4 h à 37 ° C et 5 % de CO2. Les échantillons d'étude et les PBMC témoins ont été recomptés et remis en suspension à des concentrations appropriées. Les cellules ont été ensemencées sur des plaques de fluorure de polyvinylidène (PVDF) à 96 puits selon les densités suivantes. Tous les échantillons de l'étude ont été ensemencés à 2 × 105 cellules par puits pour les deux tests ELISpot des cellules T. Les PBMC témoins des donneurs ont été ensemencées à 2 × 105 cellules par puits pour la stimulation de la phytohémagglutinine (PHA) (dosage IL-10) ou à 1 × 105 cellules par puits pour la stimulation CEF (dosage IFN-γ). Les stimulants ont été ajoutés à leurs puits correspondants en utilisant les concentrations suivantes : 10 ug par ml ID93 ; 1 µg par ml de peptides RV1813, RV2608, RV3619 ou RV3620 ; 1 à 10 µg par ml de PHA ; ou 1 µg par mL CEF. Les plaques assemblées ont été incubées pendant une nuit pendant 18 à 22 h à 37 °C et 5 % de CO2. Les plaques ont ensuite été lavées et incubées avec 1 µg par mL d'anticorps de détection anti-IFN-γ humain ou anti-IL-10 humain (Clone 7-B6-1, Cat# 3420-6-250, ou Clone 12G8, Cat# 3430 -6-250, respectivement, MabTech) à une dilution de 1000 fois pendant 2,5 h à température ambiante, lavés, incubés avec de la streptavidine-HRP pendant 1 h à température ambiante, lavés et enfin développés à l'aide de NovaRED (Vector Laboratories, Newark, CA) pendant ~15 min à température ambiante avant d'arrêter avec de l'eau distillée. Dans les 1 à 2 jours suivant le développement, les plaques ont été numérisées, comptées et soumises à un contrôle qualité à l'aide de l'analyseur ImmunoSpot.

L'activité mycobactéricide a été étudiée dans des cultures de sang total des jours 0, 7 et 224 comme décrit précédemment29. Brièvement, le milieu RPMI 1640 avec L-glutamine et HEPES (acide 4-(2-hydroxyéthyl)−1-pipérazine éthanesulfonique) a été utilisé pour diluer les échantillons de sang total hépariné, puis ces échantillons de sang total dilués ont été ajoutés dans des tubes de 2 ml avec BCG (en double) et bien plafonné. Ensuite, les tubes ont été placés sur un rotateur et mis en rotation continue pendant 72 h à 37 °C. Après l'incubation, les tubes ont été centrifugés à 13 000 × g pendant 10 min et le surnageant a été éliminé. Le culot restant de chaque tube a été remis en suspension dans un tube indicateur de croissance de mycobactéries (MGIT) additionné de PANTA, vortexé soigneusement, puis transféré dans un MGIT fluorimétrique (BD). Les MGIT avec des échantillons ont été hermétiquement bouchés et placés dans un instrument Bactec MGIT 320 (BD). Le temps de positivité (TTP) des MGIT a été automatiquement suivi et enregistré.

L'analyse immunologique a été réalisée à l'aide de Prism 9.3 ou supérieur (GraphPad Software, San Diego, CA), SAS 9.4 (SAS Institute, Cary, NC) ou R 4.03 (The R Foundation, Vienne, Autriche). Les données catégorielles ont été analysées à l'aide du test exact de Fisher et d'un niveau de signification de 0,05 (α = 0,05) avec des ajustements de Bonferroni chaque fois que des comparaisons par paires ont été effectuées entre plus de deux catégories.

Les données continues ont été comparées entre deux groupes de traitement à l'aide du test de somme des rangs de Wilcoxon, car l'hypothèse de normalité n'a été satisfaite pour aucun ensemble de données selon le test de Shapiro-Wilk. Les taux de réponse ont été comparés à l'aide du test exact de Fisher. Des différences ont été détectées sur la base d'un test bilatéral et p ≤ 0,05 (α = 0,05) avec des ajustements de Bonferroni chaque fois que des comparaisons par paires ont été effectuées entre plusieurs points dans le temps. Les comparaisons étaient accompagnées de l'estimation ponctuelle et de l'intervalle de confiance (IC) à 95 % pour chaque groupe. Les données manquantes ont été supposées manquer complètement au hasard (MCAR) et une analyse a été effectuée sur les données disponibles.

Les réponses des anticorps IgG (IgG totales, IgG1, IgG2, IgG3 et IgG4) à l'antigène ID93 ont été mesurées par ELISA en utilisant du sérum prélevé sur un participant donné. À chaque instant, le MEPT calculé à partir des doublons a été rapporté. À chaque point de temps post-injection, le rapport Post:Pre suivant a été calculé :

Un participant était considéré comme un répondeur positif pour les anticorps à un moment donné si les critères d'adéquation du système pour un ELISA donné étaient remplis et que le rapport Post:Pre à ce moment était ≥4.

Les réponses cellulaires à la protéine ID93 ont été évaluées en mesurant la production de cytokines dans les PBMC par dosage ELISpot et par ICS avec cytométrie en flux. Les tests IFN-γ et IL-10 ELISpot ont été effectués sur des échantillons des jours d'étude 0, 14, 56, 70, 84 et 224 pour déterminer la proportion de PBMC produisant de l'IFN-γ ou de l'IL-10 en réponse à une stimulation avec ID93 ou non stimulée. (PBS). Pour l'analyse, les valeurs d'unités de formation de points (SFU) soustraites au fond ont été calculées. À chaque point de temps post-injection, le changement par rapport à la ligne de base a été calculé en soustrayant la valeur SFU soustraite au fond à la ligne de base à partir d'un point de temps donné. Le SFU soustrait à l'arrière-plan et le changement par rapport au SFU de base ont été résumés pour chaque participant et chaque jour de visite. Le statut de répondeur à chaque instant a été déterminé à l'aide du modèle MIMOSA, un cadre statistique bayésien qui contrôle le taux de fausses découvertes à 0,1 %30. Les paramètres de chaîne de Markov Monte Carlo (MCMC) ont utilisé l'hyperparamètre par défaut. Plus précisément, on a supposé que les probabilités de non-répondeur et de répondeur suivaient la distribution bêta où les hyperparamètres recevaient de vagues a priori exponentiels avec une moyenne de 1000. La proportion inconnue de répondeurs était supposée être tirée d'une distribution uniforme entre 0 et 1. Chaque L'exécution MCMC a utilisé 200 000 itérations après 50 000 itérations de rodage. Le taux de répondeurs a ensuite été calculé sur la base du nombre total de participants analysés au sein de chaque groupe de traitement.

L'ICS PBMC a été réalisée sur des échantillons des jours d'étude 0, 7, 14, 56, 63, 70, 84 et 224 pour déterminer la proportion de cellules T CD4 et CD8 simples et multifonctionnelles produisant diverses combinaisons d'IFNγ, TNF, IL- 2, IL-4, IL-21 et CD154 en réponse à la stimulation ID93. Une porte a été appliquée pour chaque marqueur fonctionnel, sans tenir compte de la co-expression d'autres marqueurs (Figs. 6 à 10 supplémentaires). Des portes booléennes ont ensuite été créées sur la base des portes indiquées pour identifier les cellules exprimant diverses combinaisons de marqueurs. Nous avons analysé la population de lymphocytes T à la recherche de deux cytokines ou plus, qui étaient positives pour au moins deux marqueurs immunitaires parmi IFN-γ, TNF, IL-2, IL-4, IL-21 et CD154. Nous avons également évalué les cellules T qui exprimaient des combinaisons sélectionnées des six marqueurs immunitaires. Toutes les valeurs négatives soustraites au bruit de fond ont été mises à zéro. La fréquence de fond soustraite (%) a été calculée comme la fréquence des cellules T positives pour les cytokines pour les échantillons stimulés par ID93 moins les échantillons non stimulés (fond soustrait).

À chaque point de temps post-injection, le changement par rapport à la ligne de base a été calculé en soustrayant la fréquence soustraite de fond (%) à la ligne de base à partir d'un point de temps donné. Les fréquences de fond soustraites et les changements par rapport aux fréquences de référence ont été résumés pour chaque participant et chaque jour de visite. Le statut de réponse a été déterminé pour chaque participant, jour de visite et sous-ensemble de lymphocytes T à l'aide du modèle MIMOSA. Le taux de répondeurs a ensuite été calculé sur la base du nombre total de participants analysés au sein de chaque groupe de traitement.

De plus amples informations sur la conception de la recherche sont disponibles dans le résumé des rapports sur le portefeuille Nature lié à cet article.

Les ensembles de données générés pendant et/ou analysés pendant l'étude en cours sont disponibles auprès de l'auteur correspondant sur demande raisonnable. Cependant, les données individuelles des participants ne seront pas disponibles car le consentement éclairé ne l'incluait pas explicitement. Le protocole d'étude, la disposition des participants à l'étude et les écarts de protocole sont inclus dans les informations supplémentaires. Les données sources sont fournies avec ce document.

Organisation Mondiale de la Santé. Fiche d'information sur le rapport mondial sur la tuberculose 2021. https://www.who.int/publications/m/item/factsheet-global-tb-report-2021 (2021).

Trunz, BB, Fine, P. & Dye, C. Effet de la vaccination par le BCG sur la méningite tuberculeuse infantile et la tuberculose miliaire dans le monde : une méta-analyse et une évaluation du rapport coût-efficacité. Lancette 367, 1173-1180 (2006).

Article PubMed Google Scholar

Katelaris, AL et al. Efficacité de la vaccination par le BCG contre l'infection à Mycobacterium tuberculosis chez les adultes : une analyse transversale d'une cohorte basée au Royaume-Uni. J. Infecter. Dis. 221, 146-155 (2020).

Article CAS PubMed Google Scholar

Harvey, M. et al. Pénurie critique en immunothérapie par le BCG : comment en sommes-nous arrivés là et où cela va-t-il nous mener ? Urol. Oncol. 40, 1–3 (2022).

Article CAS PubMed Google Scholar

Bloom, BR Nouvelle promesse pour les vaccins contre la tuberculose. N. Engl. J. Med. 379, 1672-1674 (2018).

Article PubMed Google Scholar

Tait, DR et al. Analyse finale d'un essai du vaccin M72/AS01E pour prévenir la tuberculose. N. Engl. J. Med. 381, 2429-2439 (2019).

Article CAS PubMed Google Scholar

Frick, rapport M. Pipeline. https://www.treatmentactiongroup.org/wp-content/uploads/2021/10/2021_pipeline_TB_vaccines_final.pdf (2021).

Jour, TA et al. Innocuité et immunogénicité du vaccin thérapeutique d'appoint ID93 + GLA-SE chez les adultes ayant terminé le traitement de la tuberculose : un essai randomisé, en double aveugle, contrôlé par placebo, de phase 2a. Lancet Respir. Méd. 9, 373–386 (2021).

Article CAS PubMed Google Scholar

Lee, BY et al. Impact économique des vaccins thermostables. Vaccin 35, 3135–3142 (2017).

Article PubMed PubMed Central Google Scholar

Preston, KB & Randolph, TW Stabilité des formulations de vaccins lyophilisés et séchés par pulvérisation. Adv. Déliv. Rév.171, 50–61 (2021).

Article CAS PubMed Google Scholar

Qi, Y. & Fox, CB Développement d'adjuvants de vaccins thermostables. Expert Rev. Vaccines 20, 497–517 (2021).

Article CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

Kramer, RM et al. Développement d'un vaccin thermostable avec adjuvant en nanoémulsion contre la tuberculose en utilisant une approche de conception d'expériences. Int. J. Nanomed. 13, 3689–3711 (2018).

Article CAS Google Scholar

Dutil, TS et al. Ingénierie du processus de lyophilisation et thermostabilité de ID93 + GLA-SE, un candidat vaccin antituberculeux sous-unitaire avec adjuvant à flacon unique pour une utilisation dans des études cliniques. Devant. Déliv. 2, 1–19 (2022).

Article Google Scholar

Schrager, LK, Vekemens, J., Drager, N., Lewinsohn, DM & Olesen, OF L'état du développement du vaccin contre la tuberculose. Lancette infectée. Dis. 20, e28–e37 (2020).

Article CAS PubMed Google Scholar

El-Kamary, SS et al. Le vaccin à particules de type virus de Norwalk administré par voie intranasale avec adjuvant produit des anticorps et des cellules sécrétant des anticorps qui expriment des récepteurs de homing pour les tissus lymphoïdes muqueux et périphériques. J. Infecter. Dis. 202, 1649–1658 (2010).

Article CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

Atmar, RL et al. Vaccin Norovirus contre la maladie expérimentale du virus Norwalk humain. N. Engl. J. Med. 365, 2178-2187 (2011).

Article CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

Westfall, J. et al. Stabilité thermique et intégrité épitopique d'un vaccin sous-unitaire lyophilisé à base de toxine ricine. Vaccin 36, 5967–5976 (2018).

Article CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

Automne Smiley, M. et al. Immunogénicité et efficacité comparatives de la formulation thermostable (lyophilisée) et liquide du candidat vaccin contre l'anthrax AV7909. Vaccin 37, 6356–6361 (2019).

Article CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

Zipursky, S. et al. Avantages de l'utilisation des vaccins hors chaîne du froid : livraison du vaccin contre la méningite A dans une chaîne à température contrôlée lors de la campagne de vaccination de masse au Bénin. Vaccin 32, 1431–1435 (2014).

Article PubMed PubMed Central Google Scholar

Lydon, P. et al. Intérêts économiques de la conservation des vaccins à température ambiante lors de la vaccination de masse : le cas du vaccin méningite A au Tchad. Taureau. Organe mondial de la santé. 92, 86–92 (2014).

Article PubMed Google Scholar

Penn-Nicholson, A. et al. Innocuité et immunogénicité du nouveau vaccin antituberculeux ID93 + GLA-SE chez des adultes sains vaccinés par le BCG en Afrique du Sud : un essai de phase 1 randomisé, en double aveugle et contrôlé par placebo. Lancet Respir. Méd. 6, 287-298 (2018).

Article CAS PubMed Google Scholar

Coler, RN et al. L'adjuvant agoniste du TLR-4, GLA-SE, améliore l'ampleur et la qualité des réponses immunitaires induites par le vaccin contre la tuberculose ID93 : premier essai chez l'homme. npj Vaccins 3, 34 (2018).

Article PubMed PubMed Central Google Scholar

Lyadova, IV & Panteleev, cellules AV Th1 et Th17 dans la tuberculose : protection, pathologie et biomarqueurs. Médiateurs Inflamm. 2015, 854507 (2015).

Article CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

Rijnink, WF, Ottenhoff, THM & Joosten, SA Cellules B et anticorps en tant que contributeurs aux réponses immunitaires effectrices dans la tuberculose. Devant. Immunol. 12, 640168 (2021).

Article CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

Simmons, JD et al. Mécanismes immunologiques de la résistance humaine à l'infection persistante à Mycobacterium tuberculosis. Nat. Rév. Immunol. 18, 575–589 (2018).

Article CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

Lyashchenko, KP, Vordermeier, HM & Waters, WR Cellules B mémoire et tuberculose. Vétérinaire. Immunol. Immunopathol. 221, 110016 (2020).

Article CAS PubMed Google Scholar

Bertholet, S. et al. Un vaccin candidat contre la tuberculose défini stimule le BCG et protège contre Mycobacterium tuberculosis multirésistant. Sci. Trad. Méd. 2, 53ra74 (2010).

Article PubMed PubMed Central Google Scholar

Hoft, DF et al. Les vaccinations PO et ID BCG chez l'homme induisent des réponses immunitaires muqueuses et systémiques distinctes et des signatures moléculaires transcriptomiques des lymphocytes T CD4+. Immunol Muqueux. 11, 486–495 (2018).

Article CAS PubMed Google Scholar

Hoft, DF et al. Innocuité et immunogénicité du vaccin BCG recombinant AERAS-422 chez des adultes sains n'ayant jamais reçu de BCG : un premier essai de phase 1 randomisé, contrôlé contre des agents actifs chez l'homme. EBioMedicine 7, 278–286 (2016).

Article PubMed PubMed Central Google Scholar

Finak, G. et al. Modèles de mélange pour les essais sur cellule unique avec applications aux études sur les vaccins. Biostatistiques 15, 87–101 (2014).

Article PubMed Google Scholar

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Les auteurs tiennent à remercier les membres du Safety Monitoring Committee (W. Henry Boom, Fiona Smaill et Kathleen M. Neuzil), les Independent Safety Monitors (John Richart et Marie Philipneri) et le Medical Monitor (Stuart Kahn) pour leur excellente surveillance et leurs commentaires. Les auteurs tiennent également à remercier nos collègues de la Division de la microbiologie et des maladies infectieuses/NIAID/National Institutes of Health (NIH) pour les discussions utiles et engagées et la gestion du projet, notamment Larry Wolfraim, Carol Ostrye, Onyinye Erondu, Mohamed M. Elsafy, Mamodikoe Makhene, Jonathan McInnis, Michelle Wildman et Kamal Velmurugan. Les auteurs sont également reconnaissants pour la gestion de projet et l'assistance administrative de Prerana Ranjitkar, Elyse Beebe, Sandra Sivananthan, Elise Larson, Jannabeth Bannister et Tre Argerious ; et l'assistance éditoriale de Valerie Soza. Ce travail a été soutenu par des fonds fédéraux du NIAID, NIH, Department of Health and Human Services, sous le contrat #HHSN272201400041C (CBF). Le NIAID a participé à la conception de l'étude, à l'analyse et à la rédaction du manuscrit.

Entendre Frévol

Adresse actuelle : HDT Bio, Seattle, WA, États-Unis

Bridget Fisher

Adresse actuelle : Bristol-Myers Squibb, Seattle, WA, États-Unis

Jour de Tracey

Adresse actuelle : Janssen Vaccines, Leiden, Pays-Bas

Julie Vergara

Adresse actuelle : Universal Cells, Seattle, WA, États-Unis

Accès à Advanced Health Institute (anciennement Infectious Disease Research Institute), Seattle, WA, États-Unis

Zachary K. Sagawa, Cristina Goman, Aude Frevol, Bridget Fisher, Tracey Day, Raodoh Mohamath, Julie Vergara, Alan Lew, Anna Marie Beckmann, Corey Casper et Christopher B. Fox

Centre universitaire de Saint Louis pour le développement de vaccins, St. Louis, MO, États-Unis

Azra Blazevic, Janice Tennant et Daniel F. Hoft

Advanced Bioscience Laboratories (ABL), Inc., Rockville, MD, États-Unis

Stephen Jackson, Franck Lemiale, Léon Toussaint & Irene Kalisz

DF/Net Research, Inc., Seattle, WA, États-Unis

Joe Jiang et Lisa Ondrejcek

Département de santé mondiale, Université de Washington, Seattle, WA, États-Unis

Corey Casper et Christopher B. Fox

Département de médecine, Université de Washington, Seattle, WA, États-Unis

Corey Casper

Division des vaccins et des maladies infectieuses, Fred Hutchinson Cancer Center, Seattle, WA, États-Unis

Corey Casper

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AMB, BF, CBF, CC, DFH, TD et ZKS ont conçu l'étude. AL, AMB, CBF, DFH, FL, JT, LO et SJ ont supervisé la recherche. AL, AMB, CBF, DFH, FL, JT et SJ ont administré le projet. AMB, AB, DFH et RM ont fourni des ressources. CBF a acquis un financement. AMB, AF, AB, CBF, CC, CG, DFH, IK, JT, JV, LT, RM, SJ et ZKS ont contribué à l'enquête. AMB, AB, BF, CBF, DFH, JV, RM, SJ, TD et ZKS ont contribué à la méthodologie. AF, AB, CBF, CG, SJ et ZKS ont organisé les données. CBF, JJ et LO ont analysé les données. CBF, JJ, LO et ZKS ont visualisé les données. CBF et ZKS ont rédigé la première ébauche du manuscrit. AF, AB, BF, CBF, CC, CG, DFH, FL, IK, JJ, LT, SJ, TD et ZKS ont révisé et édité le manuscrit.

Correspondance à Christopher B. Fox.

CBF ne déclare aucun intérêt non financier concurrent mais les intérêts financiers concurrents suivants. CBF est co-inventeur des brevets revendiquant la priorité de WO/2015/103167, des formulations de vaccin à flacon unique, et WO/2013/119856, des formulations adjuvantes améliorées comprenant des agonistes de TLR4 et des procédés d'utilisation de celles-ci. Les autres auteurs ne déclarent aucun intérêt concurrent.

Nature Communications remercie les évaluateurs anonymes pour leur contribution à l'évaluation par les pairs de ce travail. Les rapports des pairs examinateurs sont disponibles.

Note de l'éditeur Springer Nature reste neutre en ce qui concerne les revendications juridictionnelles dans les cartes publiées et les affiliations institutionnelles.

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Réimpressions et autorisations

Sagawa, ZK, Goman, C., Frevol, A. et al. Innocuité et immunogénicité d'un candidat vaccin antituberculeux thermostable ID93 + GLA-SE chez l'adulte sain. Nat Commun 14, 1138 (2023). https://doi.org/10.1038/s41467-023-36789-2

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Reçu : 23 décembre 2022

Accepté : 16 février 2023

Publié: 06 mars 2023

DOI : https://doi.org/10.1038/s41467-023-36789-2

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